Определение дигликозида мальвидина
Лабораторная работа Тема «Методы идентификации дигликозида мальвидина»
Общие сведения. Дигликозид мальвидина относится к антоцианам, широко распространенным в природе. Основными антоцианами винограда V. vinifera являются монозиды мальвидина, пеонидина, дельфинидина, петунидина, у американских гибридов прямых производителей преобладают дигликозиды. В винограде европейских сортов дигликозиды присутствуют в незначительном количестве, а в винограде американских сортов и их гибридах концентрация дигликозидов может составлять 90% суммарного содержания антоцианов.
В винах, полученных из европейских и американских copтов, концентрация дигликозида мальвидина может достигать 50 мг/дм3 и 200 мг/дм3 соответственно.
Поскольку в странах ЕЭС и в Украине запрещено использовать американо-европейские гибриды прямых производителей для приготовления виноматериалов, уровень мальвидина не должен превышать 15 мг/дм3.
Качественное определение дигликозида мальвидина. Дигликозид мальвидина, окисленный азотистой кислотой, превращается в вещество, которое в аммиачной среде при люминесцентном облучении дает зеленую флуоресценцию. Интенсивность его флуоресценции измеряется сравнением с интенсивностью флуоресценции титрованного раствора сульфата хинина, которая установлена по эталону дигликозида мальвидина.
Свободный диоксид серы, влияющий на флуоресценцию, должен быть предварительно связан избытком уксусного альдегида.
Оборудование. Лампа ультрафиолетовая для измерений при 365 нм.
Техника определения. В пробирку вносят 10 см3 вина, 1,5 см3 раствора уксусного альдегида и выдерживают 20 мин.
В центрифужную пробирку объемом 20 см3 помещают 1 см3 вина, обработанного уксусным альдегидом, 1 каплю 1 М раствора соляной кислоты и 1 см3 раствора нитрита натрия. Перемешивают, через 2-5 мин добавляют 10 см3 спиртового раствора аммиака.
Обрабатывают в тех же условиях 10 см3 вина-свидетеля, содержащего дигликозид мальвидина (15 мг/дм3), перемешивают, выдерживают 10 мин и центрифугируют.
Декантируют прозрачную надосадочную жидкость в калиброванные пробирки. Сравнивают зеленую флуоресценцию в ультрафиолетовом свете при длине волны 365 нм анализируемого вина и вина - свидетеля.
Для розовых вин можно увеличить чувствительность, взяв 5 см3 вина, обработанного уксусным альдегидом; 0,2 см3 1 М раствора НС1; 1 см3 раствора нитрита натрия; 5,8 см3 спиртового раствора аммиака.
Параллельно обрабатывают вино-свидетель.
Вина, не дающие флуоресценции или флуоресцирующие значительно слабее вина-свидетеля, рассматривают как вина, не содержащие дигликозида мальвидина; если флуоресценция немного слабее, равна или превосходит показания свидетеля, проводят количественное определение.
Количественное определение дигликозида мальвидина.
Оборудование. Прибор для измерения флуоресценции с длиной волны возбуждения 365 нм и длиной волны флуоресцирующего лучеиспускания 490 нм.
Техника определения. Обрабатывают вино так же, как и для качественных исследований, отбирая для обработки уксусным альдегидом 1 см3 вина во всех случаях (вина красные и розовые).
Помещают раствор сульфата хинина в измерительную кювету и регулируют флуориметр на полное отклонение (пропускание Т0 равно 100%), воздействуя на ширину щели или на чувствительность. Затем определяют величину пропускания исследуемого вина (Т). Если пропускание Т выше 35%, разбавляют вино вином, не содержащим дигликозида мальвидина, флуоресценция которого должна быть менее 6% (определяют по предварительной пробе).
Расчет. Интенсивность флуоресценции для вина без S02 при условиях определения, описанных выше, за исключением добавления уксусного альдегида, соответствует 0,426 мг дигликозида мальвидина на 1 дм3 вина.
Вина красные и розовые, не содержащие дигликозида мальвидина, могут давать легкую флуоресценцию, соответствующую Т= 6%.
Массовую концентрацию в вине дигликозида мальвидина (С, мг/дм3) определяют по формуле
С = (Т- б) * 0,426 *11,5 / 10 = (Т - б) * 0,49.
В случае разбавления вина результат умножают на коэффициент разбавления.